INFORME-LAB-2-molecularII-1 - 1 Tema PREPARACIN DE REACTIVOS PARA LA ELECTROFORESIS DE GELES DE POLIACRILAMIDA Y ELECTROFORESIS TINCIN Y DESTINCIN 2

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1.Tema: PREPARACIÓN DE REACTIVOS PARA LA ELECTROFORESIS DE GELES DE POLIACRILAMIDA Y ELECTROFORESIS, TINCIÓN Y DESTINCIÓN.2.Objetivos:Preparar los geles de poliacrilamida mediante el adecuado manejo y utilización de los materiales y reactivos para realizar un corrimiento electroforético de la manera correctaDiferenciar las características entre los geles de agarosa para DNA y poliacrilamida para proteínas3.Introducción:Electroforesis en geles de poliacrilamidaLa electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) se ha convertido en una técnica popular para separar proteínas y ácidos nucleicos debido a su alta resolución, facilidad de uso y flexibilidad. La poliacrilamida es corrientemente el medio de soporte más efectivo para la electroforesis de proteínasy pequeñas moléculas de RNA. PAGE puede realizarse usando proteínas nativas (no desnaturalizadas) o desnaturalizadas. El dodecilsulfato de sodio PAGE o SDS-PAGE se utiliza ampliamente como un sistema para separar proteínas desnaturalizadas. [CAM]Los geles de poliacrilamida han remplazado a los de almidón por su mejor efecto como tamiz moleculary por proporcionar el control del tamaño de sus poros utilizando concentraciones distintas de los monómeros de partida, además de presentar adsorción despreciable del material proteico. [Fre81]4.Marco Teóricoa.¿Qué es la poliacrilamida y para que sirve?b.Cómo hay que utilizar la acrilamida, bis acrilamida para que no resulte dañina, como se utiliza.c.Semejanzas y diferencias entre los geles de poliacrilamida y geles de agarosa, para qué seutiliza cada uno de los geles, que tipos de moléculas se corren en cada gel, por qué?d.¿Cuáles son las condiciones necesarias para un buen corrimiento electroforético en geles depoliacrilamida?La separación electroforética depende de:Campo Eléctrico. Es un gradiente de potencial que posibilita que haya electroforesis. Diferencia de potencial (“V”). Se mide en voltios y es lo que define el campo eléctrico.Cuanto mayor sea, mayor será la velocidad de migración. Intensidad (“I”). Se mide en amperios y cuantifica el flujo de carga eléctrica. da cuenta dela distancia recorrida por las moléculas. Resistencia (“R”). Se mide en ohmios y cuanto mayor sea la resistencia del soporte,menor será la movilidad electroforética Temperatura. el paso de una corriente eléctrica produce calor, debe controlarse de formaestricta, puesto que puede afectar a la muestra (desnaturalizándola), al soporte e incluso alequipo electroforético (Galussi, et al.,1996)La densidad de carga de las moléculas y de su tamaño: la movilidad electroforética de una molécula estanto mayor cuanto mayor sea su carga y disminuye según aumenta su tamaño, por lo que dos proteínas
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con idéntica densidad de carga, pero de tamaño diferente pueden ser separadas, ya que el soportedificulta más el avance de la de mayor tamaño (Yábar, 2003).
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