summary - Ch.9 Recombinant DNA Technology An intact...

Info iconThis preview shows pages 1–3. Sign up to view the full content.

View Full Document Right Arrow Icon
Ch.9 Recombinant DNA Technology An intact eukaryotic genome is too complex for most types of analysis. Geneticists have  appropriated the enzymes that normally operate on foreign DNA molecules inside a bacterial   cell  and used them in the test tube to create the tools of recombinant DNA  technology. Restriction enzymes  cut DNA at defined sites ligase  splices the pieces together DNA polymerase  makes DNA copies, and reverse transcriptase copies RNA into DNA Restriction enzymes cut DNA into restriction fragments at specific sites that are 4-8base pair in  length.  Enzymes that recognize a 4 base pair site digest DNA into fragments that avg. 256 base  pair in length Enzymes that recognize 6 base pair digest DNA into fragments that avg. 4kb in length  Enzymes that recognize 8 base pair digest DNA into fragments that avg. 64 kb in length. Complete digestion  at every site recognized by a particular enzyme can occur under optimal  reaction conditions. Under less than optimal condition (of temperature, enzyme concentration,  or duration of reaction) Partial digestion  occurs in which only a random fraction of restriction sites are digested. Partial digestion  enables investigators to obtain a sample of  DNA fragments having an avg,  size in between those obtainable by complete digestion with enzymes that recognize 4,6,8 base  pair site.  Most restriction enzymes  produce DNA mol. With  sticky ends , but some produce DNA mol.  with  Blunt ends. Gel electrophoresis  provides a method for separating DNA fragments according to their size.  When biologists subject a viral genome, plasmid, or small chromosome to restriction digestion  and gel electrophoresis, they can observe  the  resulting DNA fragments  by  ethidium bromide  staining  and  determine the size of the fragments  by comparing their migration within the gel  with the migration of known  marker fragments .
Background image of page 1

Info iconThis preview has intentionally blurred sections. Sign up to view the full version.

View Full DocumentRight Arrow Icon
Cloning DNA fragments : a. Restriction fragments      and cloning vectors  with matching sticky ends  can be spliced  together to produce recombinant DNA mol. b. A cloning vector : DNA sequence that can enter a host cell, produce a selectable  phenotype and provide a means of replication and purifying both itself and any DNA to  which it is spliced. c. Different types of vectors carry different-size inserts , which can serve as the basis  for different levels of analysis. d.
Background image of page 2
Image of page 3
This is the end of the preview. Sign up to access the rest of the document.

This note was uploaded on 08/18/2008 for the course BIO 325 taught by Professor Saxena during the Summer '08 term at University of Texas at Austin.

Page1 / 25

summary - Ch.9 Recombinant DNA Technology An intact...

This preview shows document pages 1 - 3. Sign up to view the full document.

View Full Document Right Arrow Icon
Ask a homework question - tutors are online