2008 Exam 2 key - Name _ Bio336/391M Exam 2 Mar. 7, 2008 1....

Info iconThis preview shows pages 1–2. Sign up to view the full content.

View Full Document Right Arrow Icon
Name _____________________ Bio336/391M    Exam 2     Mar. 7, 2008 1. (15 points)  State whether the following types of mutations would be potentially oncogenic or not.   Briefly explain your reasoning.  a.  A mutation that results in overexpression of a ligand of a receptor tyrosine kinase (RTK).  Oncogenic. Autocrine expression of an RTK ligand could lead to constitutively on signaling.   b. A mutation in Ras that results in a loss of its catalytic activity. Oncogenic.  Loss of GTPase activity (Ras’s only catalytic activity) will lead to always-on signaling through generation of Ras- GTP c.  A mutation in an RTK that results in a loss of its catalytic activity. . Loss of tyrosine kinase activity will result in no signaling, which should NOT be oncogenic d. Deletion of both alleles of a gene encoding a phosphatase that dephosphorylates an activated RTK. Oncogenic; this will result in an inability to down-regulate an activated RTK.   e.  Gene amplification of a chromosomal region encoding a mitogen activated protein kinase (MAP kinase).   Oncogenic. Overexpression of a MAP kinase can lead to up-regulated signaling downstream of Ras. 2.  (12 points)   Design an experiment that would determine whether the transforming potential of an oncogenic Ras protein (i.e., a  codon 12 mutant) is dependent on farnesylation.  (Include how you might determine that the protein(s) of interest are actually  farnesylated).   Take an immortalized cell line such as NIH3T3 cells, which are sensitive to transformation by codon 12-mutated Ras ((we  know this from Weinberg “great experiment”).  We create a mutated oncogenic Ras gene that has the cysteine codon four  codons from the end of the protein altered to encode an alanine.  This version of the protein cannot by farnesylated (or  geranylated).  We assay this version of the gene, as well as the parental codon-12 (oncogenic) Ras for transformation of  NIH3T3 cells.  If they both transform, then farnesylation is not required for transformation.  If the cysteine mutant does not  transform, then farnesylation may be required for transformation.  We can also make GFP (green fluorescent protein) fusions  to both of these genes and determine their localization in the cell ( we can also assay the GFP versions for transformation); the  cysteine mutant should is not expected to be localized to the plasma membrane, while the  normal oncogenic Ras protein  should be.  I has many answers that proposed using previously characterized farnesyl transferase inhibitors to address the question.  A 
Background image of page 1

Info iconThis preview has intentionally blurred sections. Sign up to view the full version.

View Full DocumentRight Arrow Icon
Image of page 2
This is the end of the preview. Sign up to access the rest of the document.

Page1 / 6

2008 Exam 2 key - Name _ Bio336/391M Exam 2 Mar. 7, 2008 1....

This preview shows document pages 1 - 2. Sign up to view the full document.

View Full Document Right Arrow Icon
Ask a homework question - tutors are online