Tema 2.1_ 2-DE.pdf - \u200bProte\u00f3mica 2-D Electroforesis Espacio \u201cLa electroforesis es una t\u00e9cnica de separaci\u00f3n basada en la diferente movilidad de

Tema 2.1_ 2-DE.pdf - u200bProteu00f3mica 2-D...

This preview shows page 1 - 4 out of 8 pages.

Proteómica 2-D Electroforesis Espacio “La electroforesis es una técnica de separación basada en la diferente movilidad de las moléculas cargadas bajo la acción de un campo eléctrico en un medio conductor. Además, otras propiedades de las moléculas como su tamaño o su estructura afectarán a la velocidad de migración de estas moléculas.” Recordatorio electroforesis: Hemos comentado las propiedades tanto de agarosa como poliacrilamida como soportes para realizar las electroforesis. Lo que ya sabemos, la agarosa es principalmente usada para ácidos nucleicos y la poliacrilamida para proteínas. A saber: -A mayor concentración de agarosa menos movilidad de ADN (Ya que el poro será más pequeño). -Los geles de poliacrilamida son químicamente inertes, transparentes y estables en un rango amplio de pHs, temperatura y fuerza iónica. Acrilamida + bisacrilamida = Poliacrilamida polimerizada. Andrés Merino Moreno Universidad Miguel Hernández. BiotecUMH Segundo - Grado Biotecnología 2017/2018 Página 1 de 8
Proteómica 2-D Electroforesis Electroforesis bidimensional: La electroforesis bidimensional es el tipo de electroforesis más poderosa a nivel resolutivo. Es la única técnica que nos va a permitir separar cientos (Hasta miles) de proteínas en un mismo gel. Combina las propiedades de las electroforesis de isoelectroenfoque y las SDS-PAGE. El isoelectroenfoque será la primera etapa y nos va a permitir separar las proteínas en función de su punto isoeléctrico. P.I= pH al cual una proteína presenta carga neta 0. pH<P.I Carga positiva y viceversa. Para llevar a cabo la separación por isoelectroenfoque necesitamos primero un gradiente de pH. Tenemos una muestra heterogénea con distintas proteínas que poseen distintos PI's y distintos tamaños y esto nos va a permitir una primera separación. Una vez hecho esto, el siguiente paso es aplicar un voltaje y cada una de las moléculas cargadas migrará hacia el polo opuesto. Al cabo de un tiempo, las proteínas acaban llegando al punto del gradiente que corresponde a su P.I, y ahí dejan de migrar porque en esta región, la proteína no tiene carga y el campo eléctrico no le hace efecto. Es importante además tener en cuenta que esta etapa es desnaturalizante y que la proteína pierde su estructura tridimensional. Andrés Merino Moreno Universidad Miguel Hernández. BiotecUMH Segundo - Grado Biotecnología 2017/2018 Página 2 de 8
Proteómica 2-D Electroforesis El isoelectroenfoque se entiende muy bien, solo hay que entender que bajo un campo eléctrico las proteínas solo tienen movilidad si estas están cargadas y que esto no se cumple si se encuentran en un pH igual a su punto isoeléctrico. Fácil, sencillo y para toda la familia.

  • Left Quote Icon

    Student Picture

  • Left Quote Icon

    Student Picture

  • Left Quote Icon

    Student Picture