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DETERMINACIÓN DEL PESO MOLECULAR DE PROTEÍNAS 6 grupos de estudiantes 1. OBJETIVO DEL EXPERIMENTO El objetivo de este experimento es desarrollar el conocimiento de la estructura de las proteínas y determinar el peso molecular de proteínas desconocidas mediante ELECTOFORESIS DESNATURALIZANTE EN GEL DE POLIACRILAMIDA-SDS 2. COMPONENTES para 6 grupos de estudiantes COMPONENTES CONSERVACIÓN Marcador de Proteínas estándar A Congelador Proteína 1 desconocida B Congelador Proteína 2 desconocida C Congelador Proteína 3 desconocida D Congelador Tampón de electroforesis Tris-Glicina-SDS (10X) Temperatura ambiente Hojas de Protein InstaStain Temperatura ambiente 2.1 Material requerido y no suministrado Aparato de electroforesis vertical para proteínas. Fuente de energía para la electroforesis. 3 geles de poliacrilamidas-SDS 12%. Placa calefactora Micropipetas automáticas y puntas. Balanza. Microtubos. Agua destilada Papel de aluminio. Transiluminador de luz blanca. Ácido acético glacial (80 ml). Metanol (150 ml). Glicerol (15 ml).
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3. INTRODUCCIÓN Las proteínas son una clase muy diversificada de biomoléculas. Las diferencias en sus propiedades químicas, tales como la carga, grupos funcionales, forma, tamaño y solubilidad, les permitan realizar muchas funciones biológicas. Estas funciones incluyen la catálisis enzimática, la regulación metabólica, la unión y el transporte de moléculas pequeñas, la regulación génica, la defensa inmunológica y la estructura celular. La determinación del peso molecular de una proteína es de importancia fundamental para su caracterización bioquímica. La electroforesis en gel de SDS se usa comúnmente para obtener estimaciones de peso molecular fiables para polipéptidos desnaturalizados. Otras técnicas para la determinación de pesos moleculares muy precisos incluyen ultracentrifugación analítica y dispersión de la luz. Sin embargo, estos métodos requieren grandes cantidades de proteínas altamente purificadas y sofisticados equipos de elevado coste. Una proteína puede tener una carga positiva o negativa neta, dependiendo de su composición de aminoácidos y el pH. En ciertos valores de pH de las soluciones, la molécula puede ser eléctricamente neutra, es decir, negativa y cargas positivas están en equilibrio. En presencia de un campo eléctrico, las proteínas con cargas netas migran hacia los electrodos de carga opuesta Las proteínas presentan diferentes formas tridimensionales y los patrones de plegado están determinados por sus secuencias de aminoácidos y procesamiento intracelular. La configuración tridimensional precisa de una proteína es crítica para su función. Las formas que pueden tener estas moléculas son esférica, elíptica o en forma de varilla. El peso molecular depende del número y tipo de aminoácidos de la cadena polipeptídica. Las proteínas pueden consistir en un solo polipéptido o varios polipéptidos específicamente asociada unos con otros. Las proteínas que se
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