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Mecanismo en estado sólido. Molienda. Las células se rompen por medio de una molienda con abrasivos, por ejemplo arena o alúmina. Este procedimiento genera un estrés moderado sobre el producto, pero el costo de aplicación es bajo (UAM, 2015, p. 4). Molinos de bolas. Las células son trituradas con la ayuda de esferas de vidrio o acero, generándose un estrés elevado sobre el producto pero a un costo bajo de aplicación. Se lo utiliza a gran escala para el tratamiento de suspensiones de células vegetales (UAM, 2015, p. 14). Métodos No Mecánicos: Se encargan de romper las cubiertas celulares induciendo la lisis celular a través de medios químicos, físicos o biológicos. Son procedimientos menos severos que los mecánicos y no Figura 6. Mortero, utilizado en el laboratorio durante el proceso de homogenización por molienda. Fuente: (UAM, 2015) Figura 7: Corte Transversal de un molino de bolas, que aplica un movimiento circular al contenedor por medio de rotores, y en conjunto con las esferas de vidrio o acero generan el homogenado . Fuente: (UAM, 2015, p. 38)
generan grandes daños a las células, facilitando una posterior purificación del producto de interés, su grado de especificidad es alto; sin embargo, no son muy eficientes por sí mismos y su posibilidad de ser aplicados de manera industrial es limitada (Fongil, 2014, p. 15). Métodos Físicos. Shock Osmótico . Es el método físico más simple de aplicar y consiste en suspender a las células en un volumen de agua frecuentemente 2 veces mayor que el volumen de la célula (solución hipotónica), que porvocará que las células se expandan debido al flujo osmótico que se genera lo cual ocasiona la ruptura de la membrana celular y liberación de los componentes intracelulares (UAM, 2015, p. 19). En el caso de células vegetales, la ruptura celular por este método es compleja debido a la presencia de paredes celulares (Fongil, 2014, p. 24). Figura 8. Estados de la célula al suspenderla en soluciones hipotónicas e hipertónicas, en ambos casos ocurre lisis celular. Fuente: (Fongil, 2014, p.24) Temperaturas Extremas. También conocido como shock térmico, donde se promueve la formación y fusión de cristales de hielo, mediante la congelación (-196°C con nitrógeno líquido) y descongelación (25°C) de las células. Los cristales de hielo que se forman rompen mecánicamente la integridad del interior de la membrana celular volviéndola más permeable (Fongil, 2014, p. 25). Una vez que la proteína se ha extraído de su entorno natural está expuesta a muchos agentes que pueden dañarla. Los cambios bruscos de pH, ácidos y bases fuertes, temperaturas extremas y la acción de las proteasas (enzimas que hidrolizan los enlaces peptídicos) son los principales factores que pueden desnaturalizar las proteínas. Para evitar o minimizar estos factores la manipulación de las proteínas durante el proceso de purificación suele llevarse a cabo en disoluciones tamponadas, a bajas temperaturas (4ºC) (Ramírez, 2005, p. 2).

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