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세포 내 유전자 도&igra

세포 내 유전자 도&igra

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38 No.17 Life Science & Biotechnology 세포 내 유전자 도입법의 특징과 사용 구분 배양세포 등에 유전자 도입실험을 하고자 할 때 먼저 vector 와 도입방법을 선택해야 한다. TaKaRa에서 판매하고 있는 유전자 도입제품은 retrovirus vector, adenovirus vector, liposome을 이용한 제품이 있으며 각 방법의 특징과 사용에 대하여 소개한다. Retrovirus vector Retrovirus vector는 사람 또는 동물세포의 genome DNA에 목적 유전자를 효율적으로 도입할 수 있는 방법으로 표적세포에 감 역전사로 cDNA 합성 → 숙주 genome에 도입하는 세 과정으로 이루어진다. 분열증식하고 있는 세포의 염색체 DNA 에 유전자를 안정하게 도입할 수 있으므로 장기적으로 안정된 발현을 목적으로 하는 실험에 적합하다. 유전자 도입은 기본적 으로는 1 copy이므로 도입 유전자의 발현효율이 문제가 되며 또한 비분열세포에는 유전자를 도입할 수 없는 약점이있다. 유전자도입의 단계는 LTR과 packaging signal( ψ )을 갖는 retrovirus vector plasmid에 목적 유전자를 삽입한다. 얻어진 조합 vector plasmid를 packaging cell에 도입한다(Packaging signal ψ 서열을 제거한 provirus DNA-helper plasmid가 도입된 세포에서는 provirus에서 생성한 RNA genome이 virus 입자 들어가지 않는 empty virus particle이 생성된다. Helper cell이 라고도 한다). 위 조작으로 재조합 retrovirus를 쉽게 얻을 수 있다(그림 1). Packaging cell은 세포 은행 등에서 쉽게 구할 수 있으며 packaging cell 중의 helper 유전자( gag, pol, env )와 vector 서열 이 재조합되면 자기증식능을 갖는 retrovirus(RCR)가 생성될 수도 있다.
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