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Tema 8: “Electroforesis” 8.1 Introducción. La electroforesis es una técnica analítica que nos permite analizar el movimiento diferencial de moléculas cargadas en un campo eléctrico. Fue inventada por Arnes Tiselius (Premio Nobel de química ,1948), en 1937; buscaba separar proteínas disueltas según su carga, aunque consiguió resultados limitados: al aplicar la corriente eléctrica, tan solo consiguió aislar las proteínas según si estaban cargadas positiva o negativamente. Desarrollo el concepto de frente móvil, que más tarde se conoció con el nombre de electroforesis de zona. Con el tiempo, se desarrolló la técnica de forma que se suplió este inconveniente al utilizar matrices de características especiales sobre las que se aplicaría la muestra. De forma general, diremos que la migración de las moléculas depende de: (1) el tamaño, forma, carga y composición química de las moléculas a separar, (2) las características de la matriz a usar (como, por ejemplo, su porosidad o rigidez) y (3) del campo eléctrico aplicado. Esta técnica será muy efectiva para separar proteínas y ácidos nucleicos. 8.2 Principios de la electroforesis. El movimiento de una molécula cargada en un medio sometido a un campo eléctrico vendrá definido por la siguiente fórmula: V= q*E/f donde: v será la velocidad de la molécula; q, la carga neta de esta; E, el campo eléctrico aplicado en voltios/cm; y f, el coeficiente de fricción, que dependerá de la masa y la forma de la molécula. Sin embargo, como el amperaje al que sometamos la matriz será constante, el movimiento de una molécula cargada dependerá solo del cociente q/f. Analizando en profundidad el factor f, comentaremos que dependerá, para moléculas con similar conformación, de su tamaño; es decir, moléculas de forma similar migrarán en un campo eléctrico a una velocidad proporcional a la relación entre su carga y su masa. Por este motivo, se realizarán preparaciones previas con respecto a la muestra para homogeneizar todo lo posible la conformación molecular. Por otra parte, calcular f con precisión no será tan simple como parece: no podremos despejar el factor de la ecuación, aunque tengamos el resto de los datos, puesto que arrastraremos un error que nos dará una falsa idea acerca de la forma de la molécula; las técnicas electroforéticas estarán sujetas a muchas otras variables que afectarán al valor real del coeficiente de fricción.
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Otra forma de medir las características de estas partículas será mediante el parámetro conocido como movilidad electroforética (µ) que es la velocidad por unidad de campo eléctrico: De no variar las condiciones en que se lleve a cabo la técnica, podremos afirmar que cada tipo de molécula tendrá una carga, tamaño y movilidad electroforética únicas. 8.3 Tipos de electroforesis. Electroforesis libre : en ella, el campo eléctrico se aplica mediante dos electrodos a disoluciones o suspensiones de partículas. No será muy utilizada, ya que solo nos permite separar moléculas en dos grupos: cargadas positivamente y cargadas negativamente. Tendrá muy poca resolución. Electroforesis zonal :
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  • Raul
  • pH, Proteína, Molécula, Agente reductor, Bromuro de etidio, Cátodo

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