Tema 7- T\u00e9cnicas cromatograficas.docx - Tema 7 \u201cT\u00e9cnicas cromatogr\u00e1ficas\u201d 7.1 Introducci\u00f3n a la cromatograf\u00eda La cromatograf\u00eda nos permite

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Tema 7: “Técnicas cromatográficas”. 7.1 Introducción a la cromatografía. La cromatografía nos permite aislar y purificar biomoléculas a partir de una mezcla. Fue Mikhail Tswett (1902) quien consiguió por primera vez realizarla; aisló y caracterizó los diferentes pigmentos coloreados de los cloroplastos. Para ello, utilizó una columna de sacarosa y carbonato cálcico sobre la que dispuso extractos de plantas preparados con éter de petróleo. Se formaron zonas amarillas y verdes en la columna En un principio, definió la cromatografía como un “método en el que los componentes de una mezcla se separan en un adsorbente cuando un solvente fluye a través del mismo”. La separación de los componentes se dará por influencia de dos efectos contrapuestos: (1) la retención y (2) el desplazamiento . El primero será el efecto producido en la mezcla por una fase estacionaria , que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido; por otra parte, el desplazamiento será el efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puedeser líquida o gas. En la cromatografía, llevaremos a cabo una elución de la muestra. Eluir se definirá como “extraer, mediante un líquido apropiado, una sustancia del medio sólido que la ha absorbido”. La elución, por tanto, se considerará como la migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la fase móvil. Los componentes de la mezcla se desplazarán a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. La cromatografía será entonces un conjunto de técnicas de separación basadas en el reparto diferencial de los componentes de una mezcla entre una fase móvil y otra estacionaria. Según la forma en que las moléculas se unan o interaccionen con la fase estacionaria, diferenciaremos: 1. Cromatografía de partición/reparto : diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionarias y móvil (ambas líquidas). En ella, dos líquidos, o un líquido inmovilizado, se desplazarán sobre un soporte sólido. Nos permitirá determinar moléculas pequeñas, y determinar su coeficiente de partición como:
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2. Cromatografía de adsorción : la fase estacionaria, en este caso, tendrá un número finito de sitios de unión para las moléculas. Las interacciones entre moléculas y el soporte podrán ser de varios tipos, como iónicas, puentes de hidrógeno o hidrofóbicas. La unión será reversible. Permitirá la separación de macromoléculas, como proteínas y ácidos nucleicos. 7.2 Cromatografía plana: en papel y en capa fina. Se tratará de una cromatografía de partición; en primer lugar, analicemos la cromatografía en papel . En ella, la fase estacionaria será normalmente celulosa hidratada, mientras que la fase móvil será un solvente específico para la molécula que busquemos separar. La distribución de las moléculas tiene lugar entre el agua inmovilizada en la celulosa (líquido de la fase estacionaria: adsorbente) y el solvente utilizado como fase móvil. Por otra parte, la cromatografía en capa fina (TCL)
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  • Winter '20
  • Raul
  • Volumen, Solubilidad, Molécula, Adsorción

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