Tema 6- T\u00e9cnicas de fraccionamiento y aislamiento.docx - Tema 6 \u201cT\u00e9cnicas de fraccionamiento y aislamiento\u201d 6.1 Introducci\u00f3n general La

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Tema 6: “Técnicas de fraccionamiento y aislamiento” 6.1 Introducción general. La Bioquímica comprende el estudio de las biomoléculas que componen los seres vivos. Dichas moléculas formarán parte de las células que, a su vez, constituirán nuestros tejidos y órganos. Para poder estudiar dichas biomoléculas, primero tendremos que extraerlas y aislarlas de su entorno, ya sea una célula o un fluido biológico. El primer paso será la homogeneización del tejido de partida; una vez obtenido el extracto celular o fluido biológico, le aplicaremos diferentes técnicas de separación y análisis. 6.2 Homogeneización. Se trata del proceso mediante el cual se llevará a cabo la ruptura de tejidos y células para obtener un homogeneizado, extracto celular o extracto crudo donde se encontrarán las sustancias de interés. El objetivo será obtener biomoléculas solubles o, en algunos casos, orgánulos celulares. Métodos de homogeneización: Distinguiremos dos tipos, los mecánicos y los no mecánicos. A la hora de elegir el método a utilizar, hemos de tener en cuenta cuál es el material biológico de partida, así como la naturaleza y cantidad necesaria de la biomolécula que buscamos purificar o analizar (su sensibilidad a la degradación enzimática, oxidación…). También debemos tener clara la finalidad del experimento: si es necesario o no preservar la estructura y/o función de dichos orgánulos o biomoléculas. Por otra parte, será de gran importancia controlar la temperatura en que se realice esta técnica puesto que, dado que la mayoría de las biomoléculas serán termolábiles, podrán desnaturalizarse al subir la temperatura. · Métodos mecánicos : inespecíficos (en los que la rotura de las células se dará por acción de una fuerza mecánica) y agresivos. Requieren mucha energía y algunos generan elevadas temperaturas que podrán desnaturalizar ciertas biomoléculas. A continuación, estudiaremos sus tipos: a) Homogeneización : método suave de fricción, donde el equipo utilizado se denominará homogeneizador . Existirán tres tipos de homogeneizadores: a. Homogeneizadores de émbolo y tubo : formados por un tubo de vidrio y un émbolo entre los que existirá una separación de distinto tamaño (normalmente, mm). Al introducir el tejido a homogeneizar en el tubo, obligaremos al tejido a entrar en dicho espacio, fraccionando la muestra. Solo se utilizará este equipo para homogeneizar tejidos animales blandos (cerebro, hígado…), frecuentemente para obtener orgánulos celulares. Tendrá un buen control de temperatura, puesto que se realizará en hielo, reduciendo así el efecto del calor que se produzca durante la fricción del instrumento. Estos instrumentos podrán ser manuales o automáticos.
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b. Trituradores : también denominados blender (batidora), serán equipos de homogeneización por cuchillas. Tendrán una rotación de 6.000-50.000 rpm, dando lugar a una gran homogeneización de la muestra, que presentará fragmentos finos (4 µm). Se utilizará con tejidos vegetales y animales, no con microorganismos.
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