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DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE PROTEÍNAS
Nombres E-mail
Tosse Bravo Daniela Sofia [email protected]
Palechor Trochez Maira Cristina [email protected]
Laboratorio de Bioquímica General, Biología, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de
la Educación, Universidad del Cauca
Fecha de realización de la práctica: 27/05/2019
Fecha de entrega de informe: 10/06/2019
RESUMEN
1. INTRODUCCIÓN
La espectrofotometría estudia la interacción de la radiación electromagnética con la materia. Es el
método científico y de análisis óptico más usado en las investigaciones biológicas; utilizado para
medir cuanta luz absorbe una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz
luminoso pasa a través de la solución muestra. Esta medición también puede usarse para medir la
cantidad de un producto químico conocido en una sustancia. El estudio de la interacción de la luz
(u otra radiación electromagnética) con la materia es una herramienta importante y versátil para
la ciencia. De hecho, gran parte de nuestro conocimiento de las sustancias químicas viene de su
absorción específica o emisión de luz.
Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece ser
completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua
absorbe fuertemente en la región del infrarrojo. La absorción de las radiaciones ultravioleta,
visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica para cada
sustancia química. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la
energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se
debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo
dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.
El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o
transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene
una cantidad conocida de la misma sustancia.
El principio básico es que cada compuesto absorbe o transmite luz sobre un cierto rango de
longitud de onda. Supongamos que usted mira dos soluciones de la misma sustancia, una de color
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más oscuro que la otra. Su sentido común le dice que la de color más oscuro es la más
concentrada. En otras palabras, como el color de la solución se profundiza, se deduce que su
concentración también aumenta. Este es un principio subyacente de la espectrofotometría: la
intensidad del color es una medida de la cantidad de un material en solución.
Un segundo principio de la espectrofotometría es que cada sustancia absorbe o transmite ciertas
longitudes de onda de energía radiante pero no otras longitudes de onda. Por ejemplo, la clorofila
siempre absorbe la luz roja y violeta, mientras que transmite amarillo, verde y azul. Las