Purificacion de enzimasx - M\u00c9TODOS DE EXTRACCI\u00d3N CUANTIFICACI\u00d3N Y PURIFICACI\u00d3N DE ENZIMAS ENZIMOLOG\u00cdA NRC 8833 BARBOSA SEBASTIAN CASTA\u00d1EDA

Purificacion de enzimasx - Mu00c9TODOS DE...

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ENZIMOLOGÍA NRC: 8833BARBOSA SEBASTIAN; CASTAÑEDA CECILIA; RECALDE STEFANYMÉTODOS DE EXTRACCIÓN, CUANTIFICACIÓN Y PURIFICACIÓN DE ENZIMAS
OBJETIVO GENERALInvestigar bibliográficamente acerca de los diferentes métodos y técnicas de extracción y purificación enzimáticaOBJETIVOS ESPECÍFICOSDefinir los métodos de extracción de enzimas de acuerdo a la clasificación de métodosmecánicos y no mecánicos.Comparar entre métodos de extracción mecánicos y no mecánicos, así como entre físicos y químicos.Describir los métodos de purificación enzimática y sus características.
PURIFICACIÓN ENZIMÁTICA
Es una serie de procesosEs una serie de procesosPermiten aislar un solo tipo de proteínade una mezcla complejaPermiten aislar un solo tipo de proteínade una mezcla complejaVital para caracterización de la funciónVital para caracterización de la funciónEstructura, interacciones de la proteína de interésEstructura, interacciones de la proteína de interésLiberar a la proteína de la matrizSeparar las parte proteica y no proteicaSeparar la proteína deseada de todas las demásINTRODUCCIÓNmaterial inicial es generalmente untejido biológicoo uncultivo microbiano.
PLANIFICACIÓN INCIAL PARA ESCOGER EL MÉTODO¿CUÁL ES EL USO QUE SE LE VA A DAR?El grado de pureza necesario dependerá del uso que se va a dar a la proteína. Para investigación, la escala es reducida y es más importante la pureza que el rendimiento.Para usos terapéuticosla escala es mayor y la pureza requerida es máxima.Para usos industriales, frecuentemente se requiere gran cantidad, bajo costo y pureza menor.Fuentes naturales donde la proteína de interés es más abundante y estable. Fuentes recombinantes. Elección del organismo productor.¿CUÁL ES LA FUENTE?¿QUÉ SABEMOS DE LA PROTEÍNA?Características químicas, físicas, localización celularLa proteína es extracelular, intracelular, soluble, insoluble, asociada a membrana o localizada en una organela particular, influirá en la elección del método de extracción. Tamaño, Estabilidad, sensibilidad a la T, extremos de pH, etc.
TÉCNICAS DE ELECTROFORESIS
ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDASe basa en la aceleración de partículas cargadas en un campo eléctrico, a las que se opone la fricción debida al paso de las partículas a través del medio que las rodea, de modo que se mueven a una velocidad constante proporcional a su carga.

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