Clase 11 TM electroforesis.ppt - ELECTROFORESIS Lic Luis Augusto S\u00e1nchez Ch\u00e1vez Tecn\u00f3logo Medico \u00bfPORQUE SEPARAR AISLAR Una prote\u00edna deber ser a

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ELECTROFORESIS Lic. Luis Augusto Sánchez Chávez Tecnólogo Medico
¿PORQUE SEPARAR, AISLAR? Una proteína deber ser a menudo purificada antes de realizar estudios detallados de estructura, cinética o mecanismos de acción. Debido a que una proteína varia en tamaño, carga y solubilidad en el agua, no se puede usar un solo método para aislarla. Para aislar una proteína de 100 000 otras en un tipo particular de célula, aparte de ser una gran tarea, se necesita de métodos que puedan separarlas y detectar la presencia de proteínas especifica. Por lo tanto en cualquier molécula, sea proteína, carbohidrato o acido nucleico puede ser separada o “Resuelta” de otras moléculas en base a sus diferencias fisicoquímicas.
El término electroforesis fue introducido por primera vez en 1907 por Michaelis para definir el fenómeno por el cual una molécula que posee carga neta se desplaza en respuesta a la aplicación de un campo eléctrico. La velocidad de migración o movilidad a través del campo eléctrico dependerá de varios factores como son: la intensidad de dicho campo; la carga neta, tamaño y forma de las moléculas; así como la fuerza iónica, viscosidad y temperatura del medio en el cual las moléculas se están moviendo. La electroforesis es una herramienta analítica simple, rápida y muy sensible, lo que la convierte en una técnica de gran utilidad para la separación y el estudio de moléculas cargadas tales como proteínas y ácidos nucleicos.
La electroforesis fue desarrollada en un sistema por Arne Tiselius de suecia en los 1937s por lo que luego recibio el premio Nobel en 1948.
NATURALEZA DEL ADN Y LAS PROTEÍNAS
NATURALEZA DEL ADN
Cargas netas y pH del medio en una proteina.
BASES TEÓRICAS DE LA ELECTROFORESIS
TEORÍA Movimiento de molécula cargada en campo eléctrico: v = E q f E =campo eléctrico (volt/cm) q = carga neta de la molécula f = coeficiente de fricción (depende de masa, forma de molécula) v = velocidad de la molécula
v = E q f Voltaje aplicado: por lo general constante También puede correrse a corriente constante (cuando hay cambios de voltaje por efectos de la resistencia Si voltaje ( E) constante, movimiento de molécula cargada depende sólo de la relación q/f Si tienen la misma conformación (fragmentos lineales de DNA, proteínas globulares), f variará con el tamaño mas no con la forma Así, variables de ecuación son sólo carga (q) y la dependencia que tenga f de la masa Moléculas migrarán en el campo eléctrico a una velocidad proporcional a la relación carga/masa
FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA MIGRACION EN UNA ELECTROFORESIS 11 Medio en la cual las moléculas se están moviendo: Soporte Fuerza iónica del medio Viscosidad Temperatura Moléculas: Carga neta Tamaño Forma de las moléculas Fuerza del campo eléctrico
TIPOS DE ELECTROFORESIS Libre.

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