Es una de las tcnicas ms ampliamente usada es para

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Unformatted text preview: sistemas amortiguadores continuos o discontinuos. • En los sistemas discontinuos el amortiguador del primer En gel asegura la migración de todas las proteínas en el frente de migración, provocando la acumulación de todas las que se han cargado en el pozo. • La separación realmente comienza a partir del momento en La el que el frente de migración alcanza la frontera del segundo tampón. PAGE PAGE • La electroforesis de proteínas en geles en una La matriz de poliacrilamida es denominada electroforesis en poliacrilamida o PAGE, (“PolyAcrilamide Gel Electrophoresis”). • Es una de las técnicas más ampliamente usada Es para caracterizar mezclas complejas de proteínas. • Es un método conveniente, rápido y económico a Es nivel de muestra, pues se requieren sólo cantidades del orden de microgramos de proteína. PAGE -SDS PAGE • Su nombre significa Electroforesis en geles Su de poliacrilamida que se realiza en presencia de SDS (“SDS-polyacrilamide gel electrophoresis”). • PAGE-SDS es la electroforesis de proteínas PAGE-SDS más ampliamente usada. más • Descrita por Laemmli (1970, Nature, Descrita 277:680) 277:680) PAGE -SDS PAGE • Electroforesis desnaturalizante Electroforesis • Las muestras se desnaturalizan por calor en Las presencia de agentes desnaturalizantes: – beta-mercaptoetanol, destruye los puentes beta-mercaptoetanol, disulfuro, – SDS, desnaturaliza y recubre a la proteína y se SDS, separan como cadenas polipeptídicas aisladas. separan PAGE -SDS PAGE • Se emplea un sistema de dos tampones Se (discontinuo). – Permite la separación de volúmenes ermite relativamente grandes de muestra sin pérdida de resolución. – La concentración se produce por isotacoforesis La de la muestra en el primer gel ('stacking'). PAGE -SDS PAGE • El efecto de estrechamiento de las bandas se basa El en que: – los iones glicinato, cargados negativamente de manera los incompleta (en el amortiguador superior) tienen una movilidad electroforética inferior que los complejos de proteínas-SDS, – Estos complejos, a la vez, tienen menor movilidad que Estos los iones...
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