De geles elsticos y completamente transparentes geles

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Unformatted text preview: • • • Químicamente inertes, Químicamente Transparentes Transparentes Estables en un amplio rango de pH, Estables temperatura y fuerza iónica. CH2 N (CH2)n CH2 (CH2)n CH2 CH2 (CH2)n Relaciones %T y %C %T = a + m %C = b + a b b X 100% X 100% a = acrilamida (g) b = N,N’-metilenbisacrilamida m = volumen final (ml) • C, es crítica si es menor a 10 los geles son C, rígidos y opacos si excede 100 en geles con 5 % de acrilamida son pastosos y se rompen. de • Geles elásticos y completamente transparentes Geles se obtienen con C de 30 y con acrilamida superior al 3% superior • No hay gelificación si la acrilamida es No menor al 2% y la Bis menor a 0.5%. menor • Para que los geles sean elásticos la Para concentración de bisacrilamida debe disminuir. Puede usarse la fórmula : disminuir. C = 6.5 - 0.3T en un rango de 5-20% de acrilamida • Las proteínas presentan una carga Las eléctrica neta si se encuentran en un medio que tenga un pH diferente al de su punto isoeléctrico y por eso tienen la propiedad de desplazarse cuando encuentran en un campo eléctrico. Electroforesis nativa Electroforesis • Las proteínas se someten a una migración sin Las desnaturalización. • Las proteínas migran en función de su carga, de su tamaño Las y de su forma. • Se mantienen, en ciertos casos, las interacciones entre Se subunidades y entre proteínas. • Los sistemas amortiguadores (tampón) usados son : Los – tris-glicina (rango de pH 8.3 a 9.5), tris-glicina – tris-borato (rango de pH 7.0 a 8.5) y tris-borato – tris-acetato (rango de pH 7.2 a 8.5). Electroforesis desnaturalizante Electroforesis • Somete a las proteínas a migración Somete asegurando su desnaturalización completa (pérdida de la estructura tridimensional). • La migración es proporcional a la carga y al La tamaño de la molécula pero no a su forma. • El agente desnaturalizante más empleado es El el detergente dodecilsulfato de sodio o SDS. el Sistemas de amortiguadores Sistemas • Se puede realizar empleando sistemas de uno o más Se amortiguadores de pH, se habla entonces de...
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This document was uploaded on 12/14/2013.

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