Exam Notes - BIOCHEMISTRYLABEXAMREVIEW...

This preview shows page 1 - 3 out of 56 pages.

BIOCHEMISTRY LAB EXAM REVIEWLAB 1: ENZYMATIC CHARACTERIZATION OF HEART TRANSAMINASES BACKGROUND -Transaminases catalyze the transfer of an amino group from one amino acid to a keto acid.  -The reaction occurs without yielding free NH3; the amino group is retained through the transfer to the vitamin B6  derivative pyridoxal phosphate (PLP), a prosthetic group present within the transaminase.  -The reaction involves the formation of a Schiff base intermediate between the aminoacid and the PLP (Garrett,  R.H. and Grisham, C.M., 2004).  -Glutamate-Oxaloacetate Transaminase (GOT) and Glutamate-Pyruvate Transaminase (GPT) are responsible for  the transfer of an amino group from glutamate to oxaloacetate and pyruvate respectively.  -The transamination reaction is reversible (ΔGo  0) and can be initiated from either direction by supplying the  appropriate substrates.  -The equilibrium constant of this reversible reaction can be determined by measuring the concentration of each  component at equilibrium.  -Transaminases play an important role in amino acid metabolism: 1)deamination: most amino acids transfer their amino group to  -ketoglutarate to αform glutamate.  2)The glutamate is converted by the action of GOT into aspartate, a precursor of the urea cycle.   3) The second amino group in the urea comes from the deamination of glutamate through the glutamate  dehydrogenase reaction.  -urea excretion is the pathway used for elimination of nitrogen by most terrestrial vertebrates.  -In the muscle, GPT is responsible for the conversion of pyruvate into alanine which is delivered to the liver where  it is used for glucose synthesis. The amino group ofalanine ends up in the urea cycle (Ratner, S. 1977;  Voet, D. and Voet, J.G., 2004).  -Other transaminases are involved in the transfer of the amino group from glutamate to different keto acid  precursors of some amino acids synthesis.  
-Transaminases are intracellular enzymes, and are present in high concentrations in muscle and liver.    - Under conditions of extensive tissue damage, necrosis and cell breakdown such as hepatitis and  myocardial infarction, these enzymes leak into the blood stream. Thus, high serum levels of GPT and GOT  are indicators of those diseases.  COUPLED ASSAY OF TRANSAMINASES-Assays of transaminase activity are usually performed in the direction which generates pyruvate (GPT) or  oxaloacetate (GOT)because it is easy to measure pyruvate using the coupled oxidation of NADH to NAD.  - In an incubation buffer withan excess of NADH and lactate dehydrogenase LDH, (malate dehydrogenase, MDH,  in the case of GOT assay) the pyruvate, produced by the GPT transferral of NH2 from alanine to  -  αketoglutarate, is reduced to form lactate. Thisreduction can be measured by the decrease in 340 nm  absorbance of NADH upon oxidation to NAD. -At high levels of NADH and LDH, the conversion of pyruvate into lactate is not rate 

Upload your study docs or become a

Course Hero member to access this document

Upload your study docs or become a

Course Hero member to access this document

End of preview. Want to read all 56 pages?

Upload your study docs or become a

Course Hero member to access this document

Term
Winter
Professor
RODRIGUEZ
Tags
Biochemistry, Fatty Acids, Reaction, oxygen consumption, amino group, forward reaction

  • Left Quote Icon

    Student Picture

  • Left Quote Icon

    Student Picture

  • Left Quote Icon

    Student Picture