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Además esta técnica permite la visualización de

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Además, esta técnica permite la visualización de diferentes patrones de expresión genética en organismos durante diferentes estados fisiológicos. OBJETIVOS objetivos generales
aprender la técnica de la electroforesis y sus diversos usos en biología molecular. objetivos específicos: entender como la electroforesis separa fragmentos de ADN de tamaño diferente. Calcular y preparar los geles de agarosa para la electroforesis.
METODOLOGIA 1. preparamos un gel de agarosa con una concentración al 0,8%. Utilizamos un ADN que el profesor nos facilitó (obtenido de las practicas anteriores). Calculamos la cantidad que necesitábamos de cada reactivo para 50 ml de la solución. TBE 1X (300ml) 1,5% agarosa % = m v m = % v m =( 0 , 015 g ml ) ( 35 ml ) m = 0 , 525 gdeagarosa TBE 1X (ml) CiVi=CfVf Vi = ( 1 X )( 300 ml ) 10 X Vi = 30 ml Vtsol=Vism+Vfst Vtsol=300ml-30ml Vtsol=270 ml H2O una vez que calculamos las diferentes cantidades, añadimos los mililitros del amortiguador TBE 1X dentro de un erlenmeyer de 250ml, añadimos posteriormente los gramos de agarosa y sobre un baño maría de 85Cº
mezclamos con cuidado hasta que la agarosa se haya disuelto completamente y la solución este trasparente, para luego con ayuda de una micropipeta le añadimos 1µl de EtBr y mezclamos bien. 2. tuvimos listos un molde con un peine preparado, vertimos la solución en el molde asegurándose que la agarosa entre 50 a 60Cº y, sin que se formen burbujas. 3. dejamos el gel aproximadamente 30 minutos hasta que se endurezca. 4. transcurrido el tiempo de solidificación del gel, añadimos a la cámara de electroforesis una cantidad de amortiguador (buffer), colocamos la bandeja que contiene el gel solidificado, el buffer cubrió por completo el gel. Removimos el peine el cual creo unos Pocitos donde se agregó la muestra. 5. en un papel encerado, añadimos con la ayuda de una micropipeta 5µl de un tampón de corrida y mezclamos con 5µl de ADN que el profesor nos suministró. Mezclamos muy bien recordando que el ADN no tiene color y baja densidad, por lo tanto, de no estar bien mezclado corre el riesgo de que se salga del pocito y se pierda. Una vez listo agregamos la muestra en el segundo pocito ya que en el primero se colocó una escalera de peso molecular que el profesor nos suministró. Una vez que colocamos la muestra y escalera en su respectivo pocito conectamos la cámara a la fuente de poder, recordando que el ADN tiene una carga negativa por lo que debe viajar hacia el polo positivo. Si colocamos los cables al contrario perderemos la muestra. Dejamos corriendo la electroforesis por un espacio de 30 minutos a 93 voltios.

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