Figura 9 Representaci\u00f3n de un ESPECTROGRAMA o ESPECTRO de ABSORCI\u00d3N de un

Figura 9 representación de un espectrograma o

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Figura 9- Representación de un ESPECTROGRAMA o ESPECTRO de ABSORCIÓN de un analito. A es la banda de longitudes de onda centrada en λ1 y B es la banda de longitudes de onda centrada en λ2. Si analizamos la banda centrada en la longitud de onda λ 2, vemos que no habrá gran variación en la lectura de absorbancia a lo largo de esa banda. Por el contrario la banda centrada en la longitud de onda λ 1, muestra una variación importante en la lectura de absorbancia a lo largo de la banda. Concretamente, para tener un pequeño error debemos elegir una longitud de onda ubicada en una región plana del espectrograma correspondiente a fin de minimizar este error instrumental. λ1 λ 2
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Métodos espectrofotométricos- Teoría y Práctica 12 3- COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO UV-VIS 1- Fuente de luz policromática (para el visible lámpara de Tungsteno y para UV lámpara de deuterio). 2- Sistema óptico necesario para seleccionar una determinada longitud de onda (colimador, monocromador, selector de longitud de onda). 3- Cubeta (recipiente donde se coloca la muestra a medir, para el visible debe ser de vidrio o de plástico; para UV de cuarzo). Muchas veces al camino óptico (b) se lo denomina ancho de la cubeta . 4- Detector (Fototubo). 5- Procesador y lector de la señal. Figura 10- Representación esquemática de los componentes del Espectrofotómetro. 4- ¿CÓMO PUEDO DETERMINAR LA CONCENTRACIÓN DE UN ANALITO UTILIZANDO LA ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR UV-VIS? 4.1- Utilizando la ley de Lambert y Beer Se aplica cuando se conoce el valor del coeficiente de Absortividad Molar para el analito que queremos cuantificar a la longitud de onda de trabajo y en la solución utilizada (datos de bibliografía). En estos casos medimos la absorbancia de la muestra a analizar y utilizando la Ley de Lambert Beer podemos despejar el valor de la concentración. Esta modalidad de trabajo es la que se utiliza para medir pigmentos en extractos vegetales o productos agroindustriales. 1- 2- 3- 4- 5-
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Métodos espectrofotométricos- Teoría y Práctica 13 4.2- Utilizando el procedimiento de la curva de calibración Se aplica cuando los valores del coeficiente de Absortividad Molar no se conoce y en los casos en los que se necesita realizar una reacción previa para lograr que el analito se transforme en una especie absorbente. En la práctica generalmente el analito no absorbe luz visible, pero es fácil transformarlo en una especie absorbente mediante una reacción previa que lo transforme en un compuesto coloreado (por lo tanto que absorbe en el visible). En este procedimiento es necesario preparar una serie de soluciones de concentración conocida del analito que queremos cuantificar, hacer la reacción previa para generar el compuesto absorbente y luego medir la ABSORBANCIA de estas soluciones coloreadas en el ESPECTROFOTOMETRO UV-Vis. Tendremos entonces una tabla de datos correspondientes a pares ordenados (x,y) conocidos, los que podremos representar en un gráfico de ejes cartesianos. En el eje de las X se representan las concentraciones
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