Sistemas tamp\u00f3n utilizados en PAGE usaremos aquellos que proporcionen una

Sistemas tampón utilizados en page usaremos aquellos

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Sistemas tampón utilizados en PAGE: usaremos aquellos que proporcionen una fuerza iónica y pH adecuados para nuestras biomoléculas de interés. Para ácidos nucleicos, utilizaremos TBE (tris base, ácido bórico y EDTA; pH: 7’2) o TAE (tris base, ácido acético y EDTA; pH: 8’2). Para proteínas, utilizaremos tris 25 mM, SDS al 1 % y glicina 0’192 M, con un pH de 8’3. PAGE para proteínas en condiciones no desnaturalizantes: no se altera la conformación nativa de las proteínas, estas migrarán en función de su carga, tamaño y forma. Se utiliza esta técnica para estudiar ciertas actividades específicas de dichas proteínas, puesto que mantienen su funcionalidad. Podrán llegarse a separar incluso por complejos macromoleculares. Los tampones utilizados serán el tris-glicina, el tris- borato y el tris-acetato (todos básicos). PAGE para proteínas en condiciones desnaturalizantes: para ello, las proteínas se tratan previamente con agentes desnaturalizantes como el SDS (produce cadenas polipeptídicas lineales cubiertas por moléculas con carga negativa; es decir, será un detergente aniónico que rompe, a excepción de los puentes disulfuro, todas las interacciones de las proteínas) y agentes reductores como el β-mercaptoetanol (para romper los puentes disulfuro restantes). De esta forma, las moléculas adquieren una carga neta negativa, por lo que se separarán únicamente según su tamaño. Por lo general, no se utilizará esta técnica para analizar ácidos nucleicos. Efecto del SDS y DTT en la movilidad electroforética de proteínas...
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permitida la impresión en su totalidad. Monoméricas sin puentes disulfuro: añadamos solamente SDS o SDS y un agente reductor, obtendremos el mismo resultado.  Monoméricas con puentes disulfuro: si añadimos SDS, se mantendrán los puentes disulfuro, cambiando la movilidad electroforética de la proteína y haciéndola recorrer una distancia mayor de lo esperado; esto lo solucionaremos añadiendo un agente reductor como el DTT.  Dímero sin puentes disulfuro: el resultado será el mismo añadamos o no un agente reductor tras el SDS.  Dímero con puentes disulfuro intercatenarios: de no echar un agente reductor a la muestra, la movilidad electroforética se verá reducida, puesto que se desplazará el dímero la distancia correspondiente a su peso total (de ambos monómeros). Si usamos DTT, se resolverá cada monómero según su peso individual (tendremos una única banda si son iguales, o dos si tienen masas moleculares distintas).  Dímero con puentes disulfuro inter e intracatenarios: si no utilizamos DTT, la banda correspondiente a él se encontrará en un valor intermedio entre lo que le correspondería a sus dos subunidades (de poseer las dos igual masa) y lo que le correspondería al peso total del dímero. De aplicar DTT, obtendremos el resultado adecuado para cada monómero. Determinación del peso molecular de proteínas : para ello, utilizaremos marcadores de peso molecular, consistentes en una serie de proteínas patrón de masa conocida que añadiremos al primer pocillo del gel; según la distancia que se desplace cada marcador, podremos intuir la masa molecular de nuestra sustancia problema. Por otra parte, se
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