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C homogeneizadores rotorestator polytrón estar?

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c. Homogeneizadores rotor/estator (polytrón) : estará formado por un rotor que gira a alta velocidad en el interior de un tubo perforado que permanece fijo (estator). Da lugar a una homogeneización completa y rápida (10-60 s) mediante un mecanismo de turbulencia ligera. Se utilizará con pequeñas cantidades de tejidos animales y vegetales, no para microorganismos; especialmente, será un método perfecto para extraer ARN. b) Presurización/despresurización : también conocida como prensa francesa , ya que fue inventada por Stacy French; esta técnica se utilizará para bacterias y levaduras, no tejidos. Se introducirán microorganismos en una cámara a la que se aplicará alta presión (500 atm). Posteriormente, se abrirá una válvula; el cambio de presión que experimenten los microorganismos los hará estallar. c) Sonicación: en este caso, aplicaremos ondas ultrasonoras (ultrasonidos; 20- 50 kHz) que producirán la desgasificación de los líquidos en los que se encuentren ciertos microorganismos. Se llevará a cabo una cavitación ; es decir, formación de burbujas de gran tamaño que, al explotar, producirán tal presión que deformará y destruirá las células en suspensión. Se originarán también altas temperaturas, motivo por el que se realizará en hielo. Esta técnica no podrá usarse para estudiar ácidos nucleicos, puesto que los fragmentará; aun así, será una buena técnica para eliminar la viscosidad de muestras de ADN. d) Molienda con mortero : el mortero, normalmente de cerámica o acero inoxidable en casos especiales, nos permite pulverizar tejidos congelados (animales y plantas) previamente introducidos en nitrógeno líquido o en un congelador convencional. La congelación impedirá la degradación y desnaturalización de las biomoléculas. Será la técnica adecuada para obtener ARN de tejidos ricos en nucleasas o difíciles de homogeneizar. e) Molienda con partículas de vidrio : basada en el impacto de partículas diferentes tamaños de vidrio, acero o cerámica con células. Llevará a la rotura de microorganismos como bacterias, levaduras o esporas. · Métodos no mecánicos : Rompen las cubiertas celulares induciendo la lisis celular a través de métodos químicos, físicos o enzimáticos. Son menos severos que los mecánicos, pero serán más específicos. Se clasificarán en métodos químicos, físicos y enzimáticos. a) Métodos químicos : Compuestos químicos para desorganizar la estructura de la célula y liberar su contenido. a. Tratamiento con solventes orgánicos (cloroformo, tolueno…): disuelven componentes hidrofóbicos y permeabilizan la pared y membranas celulares de bacterias. No se utilizará para células vegetales ni animales.
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b. Tratamiento con álcalis (NaOH): saponificación de los lípidos de las membranas celulares, permeabilizándolas. Será una técnica muy severa que solo se usará cuando la molécula de interés sea resistente a pH elevado; por ejemplo, la utilizaremos para purificar plásmidos de bacterias.
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  • Winter '20
  • Raul
  • Disolvente, Sólido, Molécula, Disolución

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