42 Otro ejemplo es la heparina un ligando que retiene prote\u00ednas que reconocen

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42 Otro ejemplo es la heparina, un ligando que retiene proteínas que reconocen ácidos nucleicos, probablemente porque interaccionan como si fuese un ácido nucleico, siendo en realidad un polisacárido. Podemos utilizar la heparina unida a un soporte y utilizarlo como cromatografía de pseudoafinidad, consiguiendo luego la elución aumentando la fuerza iónica, ya que es de naturaleza electrostática la interacción. Cromatografía sobre metales inmovilizados ( IMAC). Este tipo de cromatografía se emplea mucho, está muy de moda, sobre todo para purificar proteínas recombinantes, es muy fácil de realizar y tiene un elevado poder de resolución. El soporte en esta cromatografía son geles de agarosa o sepharosa que contienen unidos metales como Zn, Co, Ni o Cu unidos a través de un quelante, que forma enlaces de coordinación con los metales. Estos metales quedan unidos por el grupo quelante, que los más empleados son el nitrilotriacetico y el iminodiacetico (el primero que se empleo), el metal forma 4 enlaces de coordinación con el grupo quelante, quedando dos enlaces libres, por lo que se une a dos moléculas de agua. Aquí cuando pasamos un extracto proteico a través del soporte, las proteínas a través de residuos de histidina pueden formar enlaces de coordinación con los grupos vacantes del metal inmovilizado. Las proteínas con residuos de histidina en su secuencia son retenidas, pero no solo histidina, también cisteína y triptófano pueden establecer estos enlaces, pero los más fuertes son los formados por histidina. Si la proteína contiene varios residuos de histidina, la interacción con los metales se ve incrementada, es más fuerte, este sistema sirve para purificar proteínas con residuos de histidina, siendo más eficiente si hay residuos de histidina contiguos. Normalmente estas cromatografías se utilizan a elevadas fuerzas iónicas, para que no funcione como intercambiador de aniones. Una vez la proteína se ha quedado retenida, hay que eluirla, que esto se puede hacer añadiendo un agente disociante, aquí funciona muy bien añadir histidina libre
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43 soluble o imidazol, estos compiten con los residuos de histidina de la proteína, quedando libre la proteína. También estos enlaces se pueden romper bajando el pH, ya que los residuos de histidina se protonan y se rompen estos enlaces de coordinación, que solo se establecen con cadenas laterales desprotonadas. Este tipo de cromatografía es muy usado para proteínas recombinantes, se añade a la proteína que queremos purificar una cola poli histidina, normalmente unas 6 histidinas, una a continuación de la otra en el extremo, la bacteria produce la proteína con la etiqueta poli histidina, a través de la cual, quedan retenidas las proteínas que queremos purificar. Esta etiqueta es útil en proteínas recombinantes ya que las bacterias no suelen sintetizar proteínas con varios residuos de histidinas contiguos, por lo que estas proteínas eluirán durante el lavado. 8.6.4. Otros tipos de cromatografía de adsorción. Cromatografía sobre hidroxiapatito.
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