Lisis inducible exponer las células a soluciones

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Lisis inducibleExponer las células a soluciones concentradas con sales y/o tratamiento radioactivo puede inducir la lisis celular.Inhibidores de pared celularAlgunas sustancias alteran la permeabilidad de la membranacelular, como: polienos, polimixinas e imidazolesTabla2. Tabla desarrollada basada en el artículo: Bangaru Balasundaram, Sue Harrison, Daniel G.Bracewell. Advances in product release strategies and impact on bioprocess design . Trends inBiotechnology, Volume 27, Issue 8, August 2009, Pages 477-485CAPITULO IIPURIFICACIÓN ENZIMÁTICA6
Métodos de extracción, purificación e inmovilización enzimáticaSin perjuicio que un preparado enzimático puede consistir en el mismo extracto o caldofermentado que sólo se somete a una clarificación y concentración (preparado líquido) odesecación (preparado sólido) se recurre también a métodos de aislamiento ypurificación de enzimas en gran escala, lo cual se logra principalmente por lossiguientes procesos:Adsorción selectivaSe emplea hidróxidos de hierro o aluminio coloidales, a cierto pH, pues no todas lasproteínas son adsorbidas en iguales condiciones. Una vez adsorbida se lava con agua osolución salina y luego sé diluye a pH diferente, generalmente alcalino mediante otrasolución salina, por ejemplo, de fosfato.PrecipitaciónEn este proceso las enzimas son fraccionadas al reducirse su solubilidad hasta el puntoen que precipitan. Esto se logra por adición de sales a cierto pH y a elevadaconcentración iónica o por solventes orgánicos (alcohol, acetona, isopropanol) a bajatemperatura. La sal más usada es el sulfato de amonio por su alta solubilidad, bajocosto, alta toxicidad para la enzima y por no afectar mayormente la viscosidad de lasolución.DiálisisEste proceso se da por gradientes de concentración a través de membranassemipermeables.UltrafiltraciónEste proceso ocurre por aspiración o presión a través de membranas de porosidad finacomo tamiz molecular. Presenta una alternativa interesante para separar enzimas, puesno hay cambio de fases, ni altos gradientes de temperatura.ElectroforesisEs un que se define como la migración de macromoléculas cargadas bajo la influenciade un campo eléctrico, y suele emplearse casi siempre a escala de laboratorio con finesanalíticos o de caracterización. Normalmente se usa una solución de elevada fuerzaiónica para concentrar e inmovilizar las proteínas, y se aplica una diferencia depotencial al gel que contiene las proteínas que migrarán en función de su carga o de supeso molecular si previamente han sido igualadas las cargas.Fraccionamiento cromatógrafoLa cromatografía es una técnica ampliamente desarrollada en la separación de proteínasy normalmente se usa para separar la enzima de interés del resto de proteínas o de otrassubstancias que interactúen fuertemente con la enzima.

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