Fotodocumentador o transiluminador Gafas de protecci\u00f3n luz ultravioleta Agua

Fotodocumentador o transiluminador gafas de

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Fotodocumentador otransiluminador.Gafas de protecciónluz ultravioleta.Aguagradomolecular.Agua destiladaestéril.Tubos Eppendorf de 1.5mL.Puntas nuevas y estérilesde diferentes volúmenes.1 Erlenmeyer de 100 mL.Máscara y gorro deprotección.Guantes de nitrileFrascos de descarteLibreta de notasLápiz marcadorJabón antibacterialPapel toallaPapel parafilmReactivos y soluciones:azulde bromofenol(tampón colorante 6X),buffer TEII, buffer TAE1X,marcadordeλHindIII, bromuro deetidio.
pozos correspondientes del gel de agarosa. Elgel debe estar previamente ubicado en lacámara de electroforesis y estar cubierto contampón TAE 1X. El azul de bromofenoles un compuestocoloreado con carga, se usa para comprobar elprogreso de la electroforesis; por su menortamaño se mueve más rápido que la mayoría delas moléculas de ADN, permitiendo ver cómoavanza el frente electroforético de la muestra;como tiene bien visible su color (azul-violeta)permite detener la electroforesis con laconfianza de que las moléculas de DNA no sehayan salido del gel.MARCADOR DE TAMAÑO MOLECU-LAR. Antes de preparar y ubicar las muestras deADN en el gel, se debe preparar el marcador detamaño molecular:En un tubo de microcentrífuga, se adiciona 1µLde marcador de tamaño molecular λHind III,3µL de tampón TE II y 1µL de la solucióntampón colorante 6X. Luego llevar la muestraa baño María a 65°C por 10min; pasado eltiempo transferir el tubo con la mezcla a hielo ahielo por otros 10min. Posteriormente seadiciona 2µL del marcador en la primera yúltima posición del gel de agarosa, en losdemás pozos se depositan las muestras de ADNya preparadas con azul de bromofenol.El marcador de tamaño molecular, sonfragmentos de ADN que están asociados conuna región particular del genoma. Se usa paraestimar los tamaños de los ADN; estándiseñados para visualizar la migración de losADN en geles de agarosas y poliacrilamida. Sumezcla de compuestos como el glicerol ayuda aprecipitar la muestra y EDTA para inhibir laactividad de nucleasas. El tipo de marcador(λHind III) usado para esta práctica, es unfragmento conocido de ADN y es obtenido apartir del DNA del virus λ por la acción de lasendonucleasas de restricción EcoRI e HindIII.CORRIDA ELECTROFORÉTICA Después de haber culminado con los pasosanteriores, se procede a posicionar loselectrodos en la cámara de electroforesis demodo que el inicio de la corrida este próximoal electrodo negativo (negro); luego seenciende la fuente de energía, se selecciona elvoltaje (70-75Wt) y tiempo de corrida (2h).Cuando termine la corrida, apagar la fuente yremover los electrodos, retirar el gel de agarosade la cámara con mucho cuidado. Por ultimovisualizarenuntransiluminadoroFotodocumentador los resultados y tomar lafotografía.

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